ECL化学发光检测试剂盒常见问题

问题	原因	方法
白色条带黑色背景	体系中HRP过量	进一步稀释HRP 标记
膜上有棕色或黄色条带
背景发亮
信号弱或无信号	HRP过量，消耗底物	进一步稀释HRP 标记
	抗原或抗体不足	增加抗体
		使用超级ECL
	转膜失败	优化转膜条件
	HRP 活性低	测试HRP 活性：暗室中，将1ul未稀释的HRP 放入装有1-2ml的基质工作    溶液的试管中。 几分钟内，溶液会立即发出蓝光。
高背景	HRP过量，消耗底物	进一步稀释HRP 标记
	封闭不充分或使用了不适当的封闭试剂	优化转膜条件
	洗涤不充分	增加洗涤时间和次数
	膜过度曝光	减少曝光时间
	抗原、抗体 过量	减少抗体上样量
	抗体特异性差	优化抗体特异性
条带有斑点	转膜失败	优化转膜条件
	x射线胶片与膜之间有气泡	去除所有气泡后，再曝光到胶片上
背景有斑点	形成聚合体	使用前通过0.2um过滤器过滤hrp -偶联物
	电泳转移过程中温度过高	控制电泳和转移过程中的温度
非特异性条带	HRP-偶联物过量	进一步稀释hrp -偶联物
	SDS导致非特异性蛋白结合	在免疫检测过程中不要使用SDS
	抗体特异性差	优化抗体特异性

 

WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...