AMPure XP磁珠试剂PCR纯化方案

该方案描述了基于SPRI 技术（固相载体可逆固定化）的 AMPure XP 试剂，应用于96和384孔板PCR产物纯化（提纯）操作步骤。该试剂利用经优化缓冲液将超顺磁珠选择性地与100 bp 及更大的 DNA 片段结合，并通过简便的洗涤步骤有效去除多余 dNTP、引物、引物二聚体、盐离子和其他杂质。

注意: 尽管其他机构组织已使用AMPure XP磁珠试剂开发了片段大小筛选方案，但我们无法确保试剂性能或是否支持此类应用。我们推荐您使用专为片段大小筛选而开发的 SPRIselect 试剂。希望了解更多关于AMPure XP和SPRIselect试剂之间的区别吗？请点击访问此页面。

96孔板操作步骤

1. 确定样品是否需进行板转移。

   如果PCR反应体积和2.8系数的乘积超过PCR板体积，则需将样品转移至300 μL圆底板或1.2 mL深孔板。

2. 振摇AMPureXP试剂瓶，以重悬任何可能已经沉降的磁珠颗粒。然后根据表中所示样品的反应体积添加AMPure XP试剂：

   样品反应体积 (μL)	AMPure XP 体积 (μL)
   10	18
   20	36
   50	90
   100	180

   AMPure XP试剂加入体积可由以下公式计算得出：

   (每次加入的 AMPure XP 体积) = 1.8 x (反应体积)

3. 该步骤中，100 bp 或更大的 DNA 片段将与磁珠结合。相比涡旋，移液器混合效果更佳，因为其结果更具可重复性。充分混匀后，混合物的颜色应呈均相状态：

   —通过移液器吸头反复吹打10次，确保试剂和样品充分混匀。将混匀样品置于室温下孵育5分钟，以获得最大回收率。

4. 将反应板置于 SPRIPlate 96孔环形超级磁力板 上2分钟，将磁珠从溶液中分离。

   重要提示: 待溶液澄清后，再继续下一步操作。

5. 当反应板置于SPRIPlate 96孔环形超级磁力板上时，执行以下步骤：

   —从反应板中吸取上清液并废弃。保留 5 μL 上清液，以避免磁珠会与上清液一同被吸出。

   重要提示: 请勿扰动磁珠。

6. 重要提示: 当反应板仍置于SPRIPlate 96孔环形超级磁力板上时，执行以下步骤。注意不要扰动磁珠。另外，请务必彻底清洗孔底，以完全清除所有残留乙醇。

   将 200 μL 70% 乙醇分装至反应板的每个孔，并置于室温下孵育 30 秒。吸取乙醇并废弃。

   注意: 如果样品加试剂的总体积超 200 μL，则洗涤样品的体积应至少为200μL。

   重复洗涤步骤两次。

   磁珠在乙醇中不易被吸取，因此无需保留上清液。

   注意: 为确保完全去除所有乙醇，可以增加磁珠干燥时间。对于 10 kb 或更大的产物片段，请勿过度干燥磁珠（若干燥过度，磁珠会出现裂痕），从而大幅降低洗脱效率。

7. 从磁力板上取出反应板，然后向反应板的每个孔中加入 40 μL 洗脱缓冲液，使用移液器混匀 10 次。孵育 2 分钟。

   液位需足够高，为使40 μL洗脱液完全浸没磁珠，可适当增加洗脱缓冲液体积。但若使用小于40 μL的洗脱缓冲液则需额外的混匀步骤（以确保液体与磁珠充分接触），另外还可能降低PCR产物的洗脱率。

8. 将反应板置于SPRIPlate 96孔环形超级磁力板上1分钟，将磁珠从溶液中分离。

9. 将洗脱液转移至新板。

   注意:通常无需担心磁珠转移到目标板中。可将样品与磁珠一同储存至冰箱，磁珠在下游的酶促反应中呈惰性。如果出于任何原因需限制磁珠残留，则可在母板中保留 2 μL – 5 μL 洗脱液。此外，可以将包含磁珠的溶液在磁力架上进行二次分离。为此，将含有磁珠的最终板放在磁力板上洗脱 1 分钟以分离磁珠。将洗脱液转移至另一块块干净的板。

   384孔操作步骤