实验原理
直链PEI单体中每3个原子含1个氮，形成胺基。每相隔二个碳原子，即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的质子海绵(proton sponge)体。这是PEI有较强的结合DNA和黏附细胞，能作为基因转导载体的重要原因。
PEI 能将 DNA 包裹成带正电荷的微粒，这些微粒能黏合到带有负电荷的细胞表面残基，并通过胞吞作用进入细胞。进入细胞后，胺的质子化导致反离子大量涌入以及渗透势降低，在低pH环境中实现DNA胞内释放。最被接受的观点是PEI上未质子化的胺可以在与膜结合的细胞器（如溶酶体）中吸收氢离子，这将导致更多氢离子的流入，诱发渗透溶胀。而质子化胺之间的排斥引起PEI构象的改变，上述变化导致的渗透膨胀使囊泡释放聚合物与 DNA 形成的复合物进入细胞质。复合物拆解后，DNA 能自由的融合到细胞核中。

实验方法
1．细胞分盘： 通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以4×105 至8×105细胞/cm2 的密度平铺细胞于60 mm 组织培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90％）。根据细胞贴壁情况于含5％ CO2 的37℃温箱中孵育8-24 h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2 mL 预热的无血清培养基。
2.制备PEI-DNA 混合物：以60 mm 组织培养皿用420 μL 反应总体积为例。准备两支1.5 mL 离心管，一管将质粒DNA（总量2-8 μg 为佳）加入240 μL HBS中，混匀。另一管中则用HBS 将100 μM 的PEI 储存液稀释成10 μM，充分混合。然后取180 μL 10 μM PEI 溶液加入含有DNA 的HBS 中，充分混匀后室温静置20-30 min。最后将这420 μL 的PEI-DNA 混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中，轻轻摇动平皿混匀，置于含5％～7％ CO2 的37℃ 温箱孵育。
注：每次用100 μM 的PEI 储存液前都需要先将其充分混匀，保证所取的浓度一致。
3. 培养6-10 h 后更换为37℃预热的含有血清的培养基，继续培养，16 h 左右可以观测到报告基因的表达。

聚乙xi亚胺“Max” (PEI MAX) 是一种功能强大、值得信赖且具有成本效益的试剂，被广泛认为是目前体外和体内的金标准转染。PEI MAX 具有高密度的可质子化氨基，每三个原子有一个氨基氮。这赋予了几乎在任何 pH 值下的高缓冲能力。因此，一旦进入内体，PEI MAX 就会破坏液泡并将遗传物质释放到细胞质中。与 DNA 的稳定络合、高效进入细胞和逃离内体的能力使 PEI MAX 成为一种高效的转染试剂，适用于多种细胞系/类型，包括最常用的 HEK293 和 CHO 细胞在贴壁和悬浮培养。与市场上其他 PEI 和脂质体转染试剂相比，PEI MAX 能够在不影响细胞活力的情况下产生高效细胞系。

主要优势

• 卓越的性能：与市场上的其他试剂相比，转染效率高，细胞毒性低，适用于更高浓度和敏感细胞。
• 低细胞毒性：更大浓度的 PEI MAX 对细胞的破坏最小
• 高品质：根据 ISO 13485 质量体系在美国采购和制造
• 灵活的工作流程：易于优化和引入应用协议。可扩展用于孔板、烧瓶和更大容量的生物反应器。
• 提供 cGMP 级以及粉末和液体两种形式。
• 成本效益：与市场上类似的转染产品相比，经济实惠。
• 历史：Polysciences 是制药和医疗设备主要参与者值得信赖的合作伙伴，在特种化学品制造领域拥有 60 多年的经验。十多年来，数以千计的客户在其研发中使用了 PEI MAX。

POLYSCIENCES 的 PEI MAX 产品在转染后 72 小时后产生高滴度的 AVV

转染含有 30mL 1×10^6 细胞/mL 悬浮 HEK293 细胞培养物的烧瓶以产生 rAAV8 CMV-eGFP。rAAV8 在转染后 48 小时从培养基中收获，随着时间的推移，在培养基中发现的载体数量不断增加（Griger 2015）。